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蛋白質(zhì)測定儀測定動物肉樣蛋白質(zhì)含量的詳細情況
來源： http://ktty36.com/ 類別：技術文章 更新時間：2014-06-17 閱讀次
動物肉樣常規(guī)理化檢測中的重要指標之一是蛋白質(zhì)含量，對于蛋白質(zhì)含量的測定，一般可以采用凱氏定氮法這種經(jīng)典方法測定。那么其測定的原理是什么呢？其實蛋白質(zhì)是一種含氮的有機化合物，將動物體肉樣與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸錢。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。在現(xiàn)代的測定過程中可以采用蛋白質(zhì)測定儀進行準確科學的測定。
樣品的制備測定動物體肉樣中的蛋白質(zhì)，涉及到取風干樣還是鮮樣測定的問題。畜體剛屠宰后，水分會隨體溫的下降而散失，所以測定應在畜體剛宰殺后取鮮樣進行。如果要測定肉樣中的其他成分，可按照以卜方法處理樣品:在動物屠宰后立即采樣進行粉碎，分作兩部分，一部分裝入棕色瓶中，貼上標簽冷貯保存，用以測定蛋白質(zhì)含量;另一部分立即測定干物質(zhì)含量m。用鮮肉樣測定蛋白質(zhì)，可減少因水分散發(fā)和制干物質(zhì)過程的誤差，且可減少做干物質(zhì)的量，減輕工作負擔。樣品的用量，GB/T14771-93}2'中規(guī)定固體樣品0.2嗯.0g，半固體樣品2}g，液體樣品10}-20mlo可根據(jù)被測樣品粗略估算其蛋白，按含氮量30}40mg確定取樣量。
樣品消化用稱量紙精密稱取一定量樣品，移入干燥的消化管中，加入0.2g硫酸銅和3g硫酸鉀(可按比例稱取一定量，混合后研磨備用)。有人建議用0.5g硫酸銅和巧g硫酸鉀，但實際操作起來表現(xiàn)為消化速度緩慢，且常常因硫酸鉀用量過大而造成結(jié)晶現(xiàn)象。有人嘗試在上述兩種試劑的基礎上增加Se粉[[3]，或用氧化汞取代硫酸銅來提高消化速度，并證明了方法的可行性。然而，Se粉和氧化汞是有毒物質(zhì)，消化時放出的氣體會對環(huán)境造成污染。接著加20ml濃硫酸，這是國標法規(guī)定的用量，但消化速度緩慢，特別是對于肉類食品。肉中的賴氨酸和組氨酸會使消化速度延長[m0據(jù)沈建明等咐民道，蛋白質(zhì)中總氮的消化速度為7.6呵h，豬肉的總氮約為2.4%，按國標法稱取1.500g(約36mgI}鮮肉樣進行消化需4.7h才能消化完全。用HZOZ來提高消化速度的實驗已由多人得到證實。筆者通過實驗，證明用H202H2S04=32林積E，添加量為15ml可有效提高消化速度，且結(jié)果準確。
裝好定氮裝置，于水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至約2/3處，加甲基紅指示液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，并檢查其氣密h。量取硼酸溶液于錐形瓶中作接收液。硼酸溶液的濃度和用量有多種說法。GB/T5009.5-1985中[8]為10mL。但是此量偏少，可能無法完全吸收逸出的氨氣。應增加硼酸溶液的用量。有實驗證明，適當增加硼酸溶液的用量不會對結(jié)果造成影響。
蛋白質(zhì)測定儀用以檢驗操作步驟精密度，國標上沒有對此作要求，但作為科研需要和力求結(jié)果準確的要求，有必要進行回收率試驗。另外，劉厚淵m用回收率試驗問接標定鹽酸標準溶液濃度，具有省時、省標準溶液的優(yōu)點。精確稱取0.5g硫酸錢，代替試樣按以上進行測定，含氮量計算公式與測粗蛋白的計算公式相同，但不乘以6.25,測得硫酸錢含氮量應為21.19}.2%o回收率按以卜公式計算:R=N/21.19X100%，式中:R代表回收率，N代表實測含氮量。每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結(jié)果。當粗蛋白百分含量大于25%，允許相對偏差為1%;粗蛋白含量大于1%，但小于等于25%時，允許相對偏差為2%;當粗蛋白含量小于等于10%時，允許相對偏差為3%。
樣品的制備測定動物體肉樣中的蛋白質(zhì)，涉及到取風干樣還是鮮樣測定的問題。畜體剛屠宰后，水分會隨體溫的下降而散失，所以測定應在畜體剛宰殺后取鮮樣進行。如果要測定肉樣中的其他成分，可按照以卜方法處理樣品:在動物屠宰后立即采樣進行粉碎，分作兩部分，一部分裝入棕色瓶中，貼上標簽冷貯保存，用以測定蛋白質(zhì)含量;另一部分立即測定干物質(zhì)含量m。用鮮肉樣測定蛋白質(zhì)，可減少因水分散發(fā)和制干物質(zhì)過程的誤差，且可減少做干物質(zhì)的量，減輕工作負擔。樣品的用量，GB/T14771-93}2'中規(guī)定固體樣品0.2嗯.0g，半固體樣品2}g，液體樣品10}-20mlo可根據(jù)被測樣品粗略估算其蛋白，按含氮量30}40mg確定取樣量。
樣品消化用稱量紙精密稱取一定量樣品，移入干燥的消化管中，加入0.2g硫酸銅和3g硫酸鉀(可按比例稱取一定量，混合后研磨備用)。有人建議用0.5g硫酸銅和巧g硫酸鉀，但實際操作起來表現(xiàn)為消化速度緩慢，且常常因硫酸鉀用量過大而造成結(jié)晶現(xiàn)象。有人嘗試在上述兩種試劑的基礎上增加Se粉[[3]，或用氧化汞取代硫酸銅來提高消化速度，并證明了方法的可行性。然而，Se粉和氧化汞是有毒物質(zhì)，消化時放出的氣體會對環(huán)境造成污染。接著加20ml濃硫酸，這是國標法規(guī)定的用量，但消化速度緩慢，特別是對于肉類食品。肉中的賴氨酸和組氨酸會使消化速度延長[m0據(jù)沈建明等咐民道，蛋白質(zhì)中總氮的消化速度為7.6呵h，豬肉的總氮約為2.4%，按國標法稱取1.500g(約36mgI}鮮肉樣進行消化需4.7h才能消化完全。用HZOZ來提高消化速度的實驗已由多人得到證實。筆者通過實驗，證明用H202H2S04=32林積E，添加量為15ml可有效提高消化速度，且結(jié)果準確。
裝好定氮裝置，于水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至約2/3處，加甲基紅指示液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，并檢查其氣密h。量取硼酸溶液于錐形瓶中作接收液。硼酸溶液的濃度和用量有多種說法。GB/T5009.5-1985中[8]為10mL。但是此量偏少，可能無法完全吸收逸出的氨氣。應增加硼酸溶液的用量。有實驗證明，適當增加硼酸溶液的用量不會對結(jié)果造成影響。
蛋白質(zhì)測定儀用以檢驗操作步驟精密度，國標上沒有對此作要求，但作為科研需要和力求結(jié)果準確的要求，有必要進行回收率試驗。另外，劉厚淵m用回收率試驗問接標定鹽酸標準溶液濃度，具有省時、省標準溶液的優(yōu)點。精確稱取0.5g硫酸錢，代替試樣按以上進行測定，含氮量計算公式與測粗蛋白的計算公式相同，但不乘以6.25,測得硫酸錢含氮量應為21.19}.2%o回收率按以卜公式計算:R=N/21.19X100%，式中:R代表回收率，N代表實測含氮量。每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結(jié)果。當粗蛋白百分含量大于25%，允許相對偏差為1%;粗蛋白含量大于1%，但小于等于25%時，允許相對偏差為2%;當粗蛋白含量小于等于10%時，允許相對偏差為3%。
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