農(nóng)藥殘留儀測(cè)試要點(diǎn)

一、農(nóng)藥分類(lèi)
農(nóng)藥是用于防治危害農(nóng)作物及農(nóng)副產(chǎn)品的病蟲(chóng)害、雜草及其他有害生物的化學(xué)藥劑的統(tǒng)稱(chēng)。其分類(lèi)方法有多種，常見(jiàn)的幾種分類(lèi)如下：
1、 根據(jù)防治對(duì)象的不同，分為殺蟲(chóng)劑、殺螨劑、殺菌劑、除草劑、殺鼠劑等。常將防治害蟲(chóng)的稱(chēng)為殺蟲(chóng)劑，防治紅蜘蛛的稱(chēng)為殺螨劑，防治作物真菌、細(xì)菌及病毒的稱(chēng)為殺菌劑，防治雜草的稱(chēng)為除草劑，防治鼠類(lèi)的稱(chēng)為殺鼠劑。
2、 根據(jù)農(nóng)藥的作用方式分為胃毒劑、觸殺劑、熏蒸劑、內(nèi)吸劑、引誘劑、驅(qū)避劑、拒食劑、不育劑等。
3、 根據(jù)農(nóng)藥的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)可分為有機(jī)農(nóng)藥和無(wú)機(jī)農(nóng)藥兩大類(lèi)。農(nóng)藥中除少部分的無(wú)機(jī)物外，大部分都為有機(jī)化合物，其中有元素有機(jī)化合物、金屬有機(jī)化合物及一般有機(jī)化合物之分。我們所測(cè)試的有機(jī)磷屬于元素有機(jī)化合物之類(lèi)。
另外還有根據(jù)農(nóng)藥的來(lái)源、農(nóng)藥的使用方法、防治原理等來(lái)分類(lèi)。
二、生化分析適用于什么農(nóng)藥
絕大多數(shù)化學(xué)農(nóng)藥之所以能殺蟲(chóng)、螨、或者有效的主要原因就在于它們對(duì)生物內(nèi)的靶酶有不同程度的抑制作用。因此，利用生化分析測(cè)試的農(nóng)藥應(yīng)該是生物體內(nèi)某種酶的抑制劑（激活劑），使得這些酶失去正常的生理作用，從而使生物表現(xiàn)出中毒的癥狀。當(dāng)然，基于目前的研究水平，有些農(nóng)藥雖然知道它對(duì)某種酶有不利的影響，但是該酶的提取，保存等因素的原因也制約著用生化方法來(lái)測(cè)試該種農(nóng)藥。所以雖然生物體內(nèi)酶的種類(lèi)很多，化學(xué)農(nóng)藥作用原理也大多基于對(duì)生物體內(nèi)酶的作用，但利用生化分析的農(nóng)藥種類(lèi)并不多。
三、測(cè)試農(nóng)藥殘留有哪些方法
農(nóng)藥殘留的測(cè)試方法，總的來(lái)說(shuō)可以分為常規(guī)測(cè)試方法和速測(cè)方法。常規(guī)的測(cè)試方法有氣
象色譜、凝膠色譜及薄層色譜法。這些方法都是利用農(nóng)藥在不同載體中的分配系數(shù)不同而得到分離，從而定性和定量來(lái)測(cè)試農(nóng)藥的種類(lèi)及含量。速測(cè)方法主要有速測(cè)卡法和酶抑制率法兩種。無(wú)論是速測(cè)卡法還是酶抑制率法，其都是利用酶活性被抑制原理。
四、乙酰膽堿酯酶對(duì)乙酰膽堿的作用原理
乙酰膽堿酯酶和乙酰膽堿作用時(shí)，首先形成一個(gè)酶底物的絡(luò)合物，接著乙酰膽堿上的�；�轉(zhuǎn)移到酶分子上,形成乙�；�酯酶。乙�；�酯酶很不穩(wěn)定，極易水解，其半衰期約為0.1毫秒。乙�；�酯酶水解后又釋放出酶分子，從而使酶復(fù)活，再循環(huán)利用。
五、有機(jī)磷及氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制過(guò)程，什么是可逆抑制
有機(jī)磷及氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥是乙酰膽堿酯酶的底物膽堿酯的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物。它們同乙酰膽堿酯酶作用時(shí)，首先形成非共價(jià)的中間復(fù)合物，然后被水解，水解的同時(shí)，磷酰基與膽堿酯酶活性中心絲氨酸羥基作用生成以共價(jià)結(jié)合的磷�；�酶。磷�；�酶中的磷�；�基很難水解，所以磷�；�酶很穩(wěn)定，其穩(wěn)定性是乙�；�酶的107倍以上。因此，可以說(shuō)有機(jī)磷對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的。不可逆抑制是指抑制劑與酶分子上的某些基團(tuán)以牢固的共價(jià)鍵結(jié)合使酶失活，它的特點(diǎn)是隨時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)逐漸的增加抑制，最后達(dá)到完全抑制。而可逆抑制是指抑制劑與酶分子結(jié)合是可逆的，不會(huì)產(chǎn)生不可逆的共價(jià)修飾等作用。
六、米氏常數(shù)的含義
米氏常數(shù)km表示酶與底物的復(fù)合物的離解常數(shù)，每一種酶對(duì)于特定的底物，都有自己特定的km。1/km稱(chēng)為酶與底物結(jié)合的親和常數(shù)。米氏常數(shù)也可以定量為在一定的酶濃度下，酶觸反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)底物的濃度。
七、預(yù)反應(yīng)過(guò)程中，影響農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率的因素
農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率的大小主要取決于農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)。當(dāng)農(nóng)藥分子中含有起作用的強(qiáng)吸電子基團(tuán)時(shí)，磷�；�與乙酰膽堿酯酶的絲氨酸羥基就愈容易結(jié)合，在一定時(shí)間內(nèi)，抑制率就愈大。當(dāng)然，對(duì)于一定的農(nóng)藥，在預(yù)反應(yīng)中，抑制環(huán)境溫度和抑制時(shí)間及農(nóng)藥濃度等都是影響抑制率大小的因素。所以在預(yù)反應(yīng)中，應(yīng)盡可能地保證環(huán)境溫度、抑制時(shí)間以及農(nóng)藥濃度的一致。有些農(nóng)藥剛配制好時(shí)測(cè)試的抑制率較大，幾天后同樣農(nóng)藥同樣條件再測(cè)試時(shí)可能抑制率又降低，這就是因?yàn)椴糠洲r(nóng)藥已經(jīng)降解，起不到抑制作用所致。
八、預(yù)反應(yīng)結(jié)束后，影響抑制率測(cè)定的因素
酶抑制率法測(cè)試農(nóng)藥殘留的過(guò)程中，預(yù)反應(yīng)完成后，再加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。測(cè)試根據(jù)為體系中顏色變化的情況來(lái)決定抑制率的大小。所以在測(cè)試一批待測(cè)樣時(shí)，加入底物和上機(jī)測(cè)試的過(guò)程應(yīng)盡量快，且加入底物的量一定要一致，也不得有任何溶液的損失，否則測(cè)出的數(shù)據(jù)時(shí)不可靠的。
九、試樣提取中應(yīng)該注意些什么
有些果蔬如蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等中含有對(duì)酶有影響的植物次生質(zhì)，有些蔬菜中葉綠素的含量太高，影響比色反應(yīng)。所以對(duì)于以上種類(lèi)的果蔬，應(yīng)盡可能的采取整株（體）浸提的辦法來(lái)消除干擾。另外，由于同一株（個(gè)）待測(cè)樣品，其不同部位的農(nóng)藥含量不同，因此，進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試時(shí)，最好為同一個(gè)待測(cè)液的不同次數(shù)測(cè)定，否則可能會(huì)出現(xiàn)因取樣不同出現(xiàn)重現(xiàn)性不好的情況。
十、藥劑應(yīng)怎樣保存
酶抑制率測(cè)試法所用的試劑大多為生化試劑，因此它們的保存條件較為苛刻。對(duì)于粉劑化的酶及底物應(yīng)保存在-20℃環(huán)境中。對(duì)于已經(jīng)配制成溶液的藥劑如酶液、底物溶液、顯色劑溶液等應(yīng)置于0-4℃環(huán)境中保存。而浸提劑無(wú)論配制成溶液與否，在常下密封保存即可。
十一、國(guó)家對(duì)農(nóng)藥殘留速測(cè)有哪些指標(biāo)，其測(cè)試方法有哪幾類(lèi)
目前國(guó)家對(duì)農(nóng)藥殘留速測(cè)出臺(tái)的標(biāo)準(zhǔn)有《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》和《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)試結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)及以及常見(jiàn)農(nóng)藥如甲胺磷、氧化樂(lè)果、克百威、敵敵畏等農(nóng)藥的最低檢出限。不同的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)所用酶的種類(lèi)及方法，規(guī)定的各種農(nóng)藥的檢出限量和判斷標(biāo)準(zhǔn)也不同。例如，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)判斷依據(jù)為抑制率大于70%時(shí)不合格，而國(guó)標(biāo)有規(guī)定抑制率大于50%為不合格，有規(guī)定吸光度值大于0.9為不合格。兩種標(biāo)準(zhǔn)所使用的方法都是利用酶被農(nóng)藥抑制，活性降低原理。其中國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，有使用乙酰膽堿酯酶，也有使用植物酯酶?面粉酶，而行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)則使用的是丁酰膽堿酯酶。

附：無(wú)公害蔬菜中幾種典型農(nóng)藥的最大農(nóng)藥殘留限量
不同的農(nóng)藥，其在不同的蔬菜品種中的允許最大殘留量是不同的，下面是DB35/432-2001中規(guī)定的幾種農(nóng)藥在蔬菜中的殘留限量。
農(nóng)藥名稱(chēng) 作物 最高殘留限量（mg/kg）
甲胺磷 蔬菜 不得檢出
克百威 蔬菜 不得檢出
氧化樂(lè)果 蔬菜 不得檢出
敵敵畏 蔬菜 0.2
敵百蟲(chóng) 蔬菜 0.1
樂(lè)果 蔬菜 1.0
毒死蟬 芹菜 0.05
番茄 0.5
辣椒 0.5
茄子 0.2
菜豆 0.2
菜花 0.05