酶標(biāo)儀的選擇、自檢和校準(zhǔn)

一、酶標(biāo)儀的選擇
面對(duì)類型如此眾多的酶標(biāo)儀，實(shí)驗(yàn)室在選擇時(shí)往往有難以適從的感覺(jué)。一般來(lái)說(shuō)，用于酶免疫測(cè)定比色的酶標(biāo)儀可分為普通酶標(biāo)儀，多功能全自動(dòng)酶標(biāo)儀和全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)等，普通酶標(biāo)儀的功能基本上相當(dāng)于一個(gè)微孑L板比色計(jì)，而多功能全自動(dòng)酶標(biāo)儀除了有微孔板比色功能外，還有酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)，紫外乃至凝集等多種檢測(cè)功能；全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)則有試劑“開(kāi)放”和“限定”之分，所謂試劑“開(kāi)放”是指不同品牌的ELISA試劑均可用于該儀器，而試劑“限定”則必須使用儀器專用的酶免測(cè)定試劑。實(shí)驗(yàn)室在選擇酶標(biāo)儀時(shí)，一般應(yīng)遵循這樣幾條原則：
1．根據(jù)工作需要去選擇。切忌刻意去求功能多，因?yàn)橐粍t如果儀器功能過(guò)多，易出故障，二則有些功能如酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)或凝集等，可能根本就用不上；如果擬購(gòu)置的酶標(biāo)儀主要是用于定性測(cè)定，則不必要求完美的定量所需的軟件系統(tǒng)。至于全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)則對(duì)工作量比較大的血站或大型醫(yī)院較為適用，對(duì)于日常工作量不太大的實(shí)驗(yàn)室，就無(wú)必要。
2．根據(jù)酶標(biāo)儀的性能去選擇。反應(yīng)酶標(biāo)儀性能的指標(biāo)主要有測(cè)定波長(zhǎng)范圍，濾光片配置，檢測(cè)速度，吸光度范圍，線性范圍，分辨率，準(zhǔn)確度，精密度等。
3．根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的財(cái)力去選擇。酶標(biāo)儀品種類型多，由于性能不一，價(jià)格自然也就相差較大，實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自己的財(cái)力去選擇性能／價(jià)格比較為合適的酶標(biāo)儀。
4．根據(jù)售后服務(wù)去選擇。實(shí)驗(yàn)室儀器買了以后，就跟我們家里使用的家用電器一樣，在使用過(guò)程中及使用一段時(shí)間之后，很可能就會(huì)有保修或維修方面的問(wèn)題，因此一定要選擇售后服務(wù)好的公司的酶標(biāo)儀。
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)室人員的外語(yǔ)水平去選擇。進(jìn)口酶標(biāo)儀現(xiàn)有不少已使用中文人機(jī)對(duì)話，對(duì)于英語(yǔ)上有困難的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)盡可能選用此類酶標(biāo)儀。
確定了選擇原則以后，就是怎樣去選擇了。選擇的步驟首先是要獲取有關(guān)酶標(biāo)儀的信息資料，一般有這樣幾條途徑：
①向已購(gòu)不同酶標(biāo)儀的多家實(shí)驗(yàn)室同行咨詢?cè)L問(wèn)，獲取最直接的使用效果的信息；
②酶標(biāo)儀銷售商的信息廣告及介紹；
③權(quán)威機(jī)構(gòu)的儀器評(píng)估報(bào)告。
獲取了盡可能多的酶標(biāo)儀信息資料后，就是對(duì)不同類型的酶標(biāo)儀的性能指標(biāo)進(jìn)行比較，選擇較為適合本實(shí)驗(yàn)室的一種或二，三種再向銷售商作進(jìn)一步的詳細(xì)咨詢了解，以決定選擇哪一種進(jìn)行自檢。
二、酶標(biāo)儀的自檢和校準(zhǔn)從上述所獲的酶標(biāo)儀性能的有關(guān)信息資料，基本上可以說(shuō)是間接的，有了目標(biāo)以后，如果還想獲得對(duì)某一酶標(biāo)儀的感性認(rèn)識(shí)，可以對(duì)其進(jìn)行自檢，主要有下述幾個(gè)方面。
(一)外觀
酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱，型號(hào)，編號(hào)，生產(chǎn)廠家，出廠日期和電源電壓；各調(diào)節(jié)旋鈕，按鍵和開(kāi)關(guān)均能正常工作，外表面無(wú)明顯機(jī)械損傷；顯示文字應(yīng)清楚完整。
(二)酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長(zhǎng)，在吸光度o．0A處，測(cè)定標(biāo)稱值為1．0A的光譜中性濾光片(測(cè)定操作按儀器說(shuō)明進(jìn)行)，記錄儀器示值或均值，10min后再次記錄儀器示值或均值，前后兩次測(cè)定值之差不應(yīng)超過(guò)±0．005A。
(三)吸光度測(cè)定的準(zhǔn)確度
選用405，492和620 nm波長(zhǎng)，以空氣為參比，分別測(cè)定標(biāo)稱值為0．5和1．0A的光譜中性玻璃濾光片，用專用測(cè)試板代替酶標(biāo)板，按儀器說(shuō)明連續(xù)測(cè)定3次，按下式計(jì)算準(zhǔn)確度：AA＝1／3(A、+A。+A3)—A：(A：為標(biāo)準(zhǔn)值)。
(四)吸光度測(cè)定的重復(fù)性
波長(zhǎng)選擇同(3)，在酶標(biāo)板第一排加注空白溶液，第二排加入濃度為200rig／ml的重鉻酸鉀溶液，重復(fù)測(cè)定5次。記錄每次測(cè)定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值與各次對(duì)應(yīng)孔吸光度值。按下式計(jì)算重復(fù)性：

（五）酶標(biāo)儀的線性
選用540nm波長(zhǎng)，將標(biāo)稱值o．5，1．0A中性濾光片分別放入專用測(cè)試板樣本位置中，以空氣為參比，各重復(fù)測(cè)定3次；然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專用測(cè)試板的同一孔位中，重復(fù)測(cè)定3次。線性誤差：

式中A1為第一片中性濾光片吸光度均值，A：為第二片中性濾光片吸光度均值，A1，2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
(六)測(cè)定速度的檢定 ．
選用492nm波長(zhǎng)，放人96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測(cè)定，用秒表計(jì)測(cè)儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時(shí)間。
酶標(biāo)儀除了在選購(gòu)時(shí)，應(yīng)盡可能自檢外，在使用中也應(yīng)定期檢定，以保證酶標(biāo)儀測(cè)定的有效性。
附：200ttg／ml重鉻酸鉀溶液的配制
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中，在105±5℃下烘2h后，置于干燥器內(nèi)冷卻30min，在分析天平上準(zhǔn)確稱取o．2829g，置于100ml燒杯中，用o．05mol／L稀硫酸溶解后，移入500ml容量瓶中，以少量o．05mol／L稀硫酸洗燒杯3次，洗液并入容量瓶中，用0．05mol／L稀硫酸稀釋至刻度線，搖勻。