凱氏定氮儀檢測(cè)食品蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)報(bào)告

    凱氏定氮儀檢測(cè)法是測(cè)定食品中蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法,測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定,準(zhǔn)確。但操作煩瑣,樣品消化費(fèi)時(shí)費(fèi)事,消化時(shí)排放的SO2直接危害操作人員的身體健康。而全自動(dòng)蛋白質(zhì)分析儀價(jià)格昂貴,目前尚難普及。本文用KDY-04(A)定氮儀對(duì)食品中蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果與經(jīng)典凱氏定氮法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確,分析速度快,消除了空氣污染,可用于批量樣品中蛋白質(zhì)的測(cè)定。

1　材料與方法
1·1　儀器與試劑　KDY-04(A)定氮儀;樣品裝置:4孔消化器;鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:c(HCI)=0·0500mol/L;硫酸(ρ20=1·84g/ml);氫氧化鈉溶液(400g/L);硼酸溶液(20g/L);指示液:1份甲基紅乙醇溶液(1g/L)和5份溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L),臨用時(shí)混合;催化劑:硒粉或硫酸鉀+硫酸銅(10+1);過(guò)氧化氫(30%)。
1·2　測(cè)定方法
1·2·1　樣品消解　準(zhǔn)確稱取0·5~2·0g混勻固體樣品或吸取5·0~10·0ml液體樣品于干凈的消化管內(nèi),加0·5~1·0g硒粉或10g硫酸鉀+1g硫酸銅,10ml硫酸,搖勻,加10ml過(guò)氧化氫,混勻,將消化管放入消化器,放上裝好密封圈的排污管,打開(kāi)抽氣三通進(jìn)水,使抽氣三通處于吸汽狀態(tài)。接通電源,進(jìn)行消化,如遇難消化的奶粉等樣品,可于消化過(guò)程中適當(dāng)增加過(guò)氧化氫的加入量,至消化液呈透明藍(lán)綠色液體,關(guān)閉電源,冷卻,定容至100ml。此過(guò)程約需1~2h。

1·2·2　測(cè)定　打開(kāi)電源,按儀器說(shuō)明書(shū)調(diào)試儀器進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)(約0·5min)。把裝有50ml硼酸溶液及2~3滴指示液的三角瓶放到接收托盤(pán)上,接收管插入液面,再將內(nèi)裝適量消化樣品的消化管放到蒸餾器上,加20ml純水及消化時(shí)硫酸5倍量的氫氧化鈉液,打開(kāi)蒸汽開(kāi)關(guān)進(jìn)行蒸餾。當(dāng)流出液至150ml左右時(shí)下移接收瓶,使接收管脫離液面,用純水沖洗接收管,繼續(xù)蒸餾0·5min,結(jié)束。取下消化管,關(guān)掉蒸汽開(kāi)關(guān),儀器還原到待機(jī)狀態(tài)。餾出液用0·0500mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紫色為終點(diǎn),計(jì)算蛋白質(zhì)含量。同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)。
2　定氮儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2·1　方法對(duì)比　分別用經(jīng)典的凱氏定氮法和KDY-04(A)定氮儀測(cè)定不同種類(lèi)樣品的蛋白質(zhì)含量。2種方法對(duì)同一樣品的測(cè)定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0·361,P>0·05)。(表1)。2·2　精密度測(cè)定取蛋白質(zhì)含量不同的樣品,每一種樣品平行測(cè)定6次,結(jié)果見(jiàn)表2。測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均<2%。2·3　準(zhǔn)確度測(cè)定　取蛋白質(zhì)含量不同的樣品,加入一定量的硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),經(jīng)測(cè)定回收率為97·6%~101·9%。(表3)。3　討論經(jīng)典的凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì),裝置復(fù)雜,程序繁瑣,消化時(shí)間長(zhǎng),對(duì)環(huán)境污染較大,蒸餾過(guò)程較難控制,易發(fā)生倒吸現(xiàn)象而致實(shí)驗(yàn)失敗。而用KDY-04(A)定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)則克服了以上的不足,采用封閉消化,樣品不易受污染,也消除了環(huán)境污染;一次可消化多個(gè)樣品;不會(huì)出現(xiàn)蒸餾倒吸現(xiàn)象,提高了工作效率。消化過(guò)程中加入適量的過(guò)氧化氫,使反應(yīng)更加充分、快速,消化更徹底。且儀器價(jià)格相對(duì)便宜,適于基層單位應(yīng)用�？梢晿悠分械鞍踪|(zhì)含量高低,適當(dāng)增減取樣量或測(cè)定樣品體積。無(wú)催化劑硒粉時(shí),可使用硫酸銅和硫酸鉀作催化劑。

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,KDY-04(A)定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì),測(cè)定結(jié)果與經(jīng)典的凱氏定氮法基本一致,經(jīng)t檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0·361,P>0·05)。該法分析速度快,操作簡(jiǎn)便,消除了空氣污染,適用于批量樣品中蛋白質(zhì)的測(cè)定。

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