水稻成熟種子直鏈淀粉含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)

水稻成熟種子中直鏈淀粉含量（AC）的測(cè)定
1.1 樣品前處理

       以株為單位混收部分種子。從每一單株上所結(jié)的成熟種子中選取 50 粒左右，一部分用于測(cè)定糊化溫度，一部分合后磨成精米粉，按部頒標(biāo)準(zhǔn) NY147-88 所示方法用于直鏈淀粉分析儀測(cè)定直鏈淀粉含量。
1.2 大量測(cè)定
      種子成熟后，按單株收獲。直鏈淀粉含量的測(cè)定按農(nóng)業(yè)部部頒標(biāo)準(zhǔn) NY147-88進(jìn)行。在萬(wàn)分之一天平上準(zhǔn)確稱取 50mg 干精米粉，裝入 50ml 帶刻度試管中；然后在試管中加入 0.5ml 無(wú)水乙醇，輕搖試管使樣品濕潤(rùn)分散, 再加入 4.5ml 1.0mol/l的 NaOH 溶液，混勻；將試管置沸水浴中煮 20min，冷卻至室溫后用蒸餾水定容至刻度，充分混勻；吸取 5ml 消化液，加入已盛有 20ml 左右蒸餾水的 100ml 容量瓶中；加入 1.0ml 1.0mol/l 的乙酸溶液，使樣品酸化；加入 1.5ml 0.02% 的碘液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻后放置 15 min；在分光光度計(jì)上于 620nm 波長(zhǎng)下用 1cm比色杯測(cè)定光密度值；最后以標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)得的光密度值及其相應(yīng)的直鏈淀粉含量制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)此計(jì)算待測(cè)樣品的直鏈淀粉含量。每一樣品做 2 重復(fù)。
1.3 單粒測(cè)定
       取精米研磨成粉并過(guò) 100 目篩，再烘干。準(zhǔn)確稱取 5～10mg 干精米粉，裝入50ml 帶刻度試管中；然后在試管中加入 0.2ml 無(wú)水乙醇，輕搖試管使樣品濕潤(rùn)分散, 再加入 0.9ml 1.0mol/l 的 NaOH 溶液，混勻；將試管置沸水浴中煮 20min，冷卻至室溫后用蒸餾水定溶至刻度，充分混勻；吸取 25ml 消化液，加入已盛有 20ml左右蒸餾水的 100ml 容量瓶中；加入 1.0ml 1.0mol/l 的乙酸溶液，使樣品酸化；加入 1.5ml 0.02% 的碘液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻后放置 15 min；在分光光度計(jì)上于 620nm 波長(zhǎng)下用 1cm 比色杯測(cè)定光密度值；最后以標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)得的光密22度值及其相應(yīng)的直鏈淀粉含量制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)此計(jì)算待測(cè)樣品的直鏈淀粉含量。
水稻成熟種子中膠稠度和糊化溫度的測(cè)定
         以株為單位混收部分種子。從每一單株上所結(jié)的成熟種子中選取 50 粒左右，一部分用于測(cè)定糊化溫度，一部分混合后磨成精米粉，按部頒標(biāo)準(zhǔn) NY147-88 所示方法用于測(cè)定直鏈淀粉含量和膠稠度。
2.1水稻成熟種子淀粉粘滯性譜（RVA）分析采用澳大利亞Newport Scientific 儀器公司生產(chǎn)的3-D型RVA儀進(jìn)行快速測(cè)定，用 TCW（thermal cycle for windows）配套軟件進(jìn)行分析。根據(jù)操作規(guī)程，含水量為14.0%時(shí)，樣品量為 3.00g，蒸餾水 25.0ml。在攪拌過(guò)程中，罐內(nèi)溫度變化如下：50℃下保持1min；以12℃/ min的速度上升到95℃（3.75min）；95℃下保持2.5 min；以 12℃/ min 下降到 50℃（3.75min）；50℃下保持 1.4min。攪拌器在起始 10s 內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)速度為 960r/min，之后保持在 160r/min。粘滯性值用 RVU（RVA 粘度單位）表示。RVA 譜特征除用峰值粘度（peak viscosity）、熱漿粘度（hot viscosity）和冷膠粘度（cool viscosity）描述外，還用崩解值（breakdown, 峰值粘度-熱漿粘度）、消減值（setback, 冷膠粘度-峰值粘度）和回復(fù)值（consistence, 冷膠粘度-熱漿粘度）等來(lái)表示（AACC，1995）。
2.2 稻米籽粒掃描電鏡觀察成熟期選擇部分轉(zhuǎn)基因系及其對(duì)照，按單株選擇相同熟期的整個(gè)單穗，自然曬干。從各個(gè)單穗上取相似生長(zhǎng)位置的強(qiáng)勢(shì)粒。于 Philips XL 30-ESEM（環(huán)鏡掃描電子顯微鏡）環(huán)掃下觀察籽粒橫向的自然斷裂面的淀粉充實(shí)情況。
2.3 田間性狀調(diào)查按完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，種植轉(zhuǎn)基因純合體及未轉(zhuǎn)化對(duì)照，2 次重復(fù)，分小區(qū)種植，每行 15 株，每列 8 株。每個(gè)小區(qū)隨機(jī)取 10 株考察主要農(nóng)藝性狀，考察內(nèi)容包括：株高、穗長(zhǎng)、單株分蘗數(shù)、結(jié)實(shí)率和千粒重，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較轉(zhuǎn)基因純合體主要農(nóng)藝性狀與未轉(zhuǎn)化對(duì)照的差異。

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