蔬菜農(nóng)殘儀檢測(cè)技術(shù)和檢測(cè)注意事項(xiàng)

1、農(nóng)殘儀檢測(cè)原理
     農(nóng)殘速測(cè)儀檢測(cè)原理是采用酶抑制法，在一定條件下。有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥能抑制膽堿酯酶的活性，其抑制率與農(nóng)藥的濃度星正相關(guān)11-21。在正常情況下，酶催化代謝產(chǎn)物水解．其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在410am處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率的大小可以判斷樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。
2、農(nóng)殘速測(cè)方法
2．1試劑配制與保存
2．1．1緩沖液。用量筒量取500mL蒸餾水，先用少量(100一150 mL)的蒸餾水緩緩倒入放有緩沖   劑干粉的量杯中，用玻棒攪拌至完全溶解后將量筒中剩余的蒸餾水倒人量杯中充分?jǐn)嚢?搖勻)，待用。
2．1．2顯色劑。用刻度吸管吸5．2 mL緩沖液注入顯色劑瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0—5℃環(huán)境中備用，切勿冷凍。
2．1．3底物。用刻度吸管吸5．2 mL蒸餾水注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于嘰5 cc環(huán)境中備用。
2．2樣液制備
取干凈的蔬菜，用天平準(zhǔn)確稱(chēng)取2 g，葉菜取葉片部分，果菜橫截削下一片，葉片、瓜肉等剪成I cm2，置于100 mL小燒杯內(nèi)；用吸管吸10 mL緩沖液注入小燒杯中，振蕩提取2 min左右；提取結(jié)束后靜置2—3 min，取上層清液作為樣液。
2．3儀器操作與樣品測(cè)定
2．3．1儀器預(yù)熱。接通電源，儀器自檢，自檢結(jié)束后待機(jī)預(yù)熱10 min．儀器工作穩(wěn)定后進(jìn)行測(cè)量13-71。
2．3．2對(duì)照測(cè)定。向檢測(cè)板最左排比色孔中用專(zhuān)用的移液槍分別加10卜L酶試劑，再用250斗L移液槍吸取250斗L緩沖液于比色孔，按上下鍵選擇“啟動(dòng)振板”菜單后按“確認(rèn)”鍵啟動(dòng)振板10 S，振板結(jié)束后。讓酶試劑和緩沖液混合液靜置反應(yīng)10 min，用專(zhuān)用的移液槍向比色孔分別加入lO斗L顯色劑和10斗L底物，立即將檢測(cè)板放入托盤(pán)，按“對(duì)照”鍵測(cè)量(反應(yīng)時(shí)間設(shè)為l min)。測(cè)試結(jié)束，按“確認(rèn)”鍵顯示對(duì)照吸光度變化值。待空白對(duì)照值的吸光度變化值在0．15加．30，才可測(cè)定樣品。否則要重新做空白測(cè)定。測(cè)量結(jié)束后儀器自動(dòng)保存當(dāng)前的對(duì)照值，下一次測(cè)量樣品時(shí)就可以
2．3．3樣品測(cè)定。若已完成各通道的對(duì)照測(cè)試，將檢測(cè)板上所有比色孔作為樣品測(cè)量。用不同移液槍分別給比色孔加酶液10“L／孔，加注樣品液250斗【／孔，顯色劑lO斗L／孔。操作步驟同對(duì)照測(cè)試，最后按“樣品”鍵測(cè)量，測(cè)試結(jié)束后，顯示當(dāng)前測(cè)量的樣品抑制率結(jié)果和吸光度變化值�？筛鶕�(jù)需要打印被測(cè)樣品抑制率。
2．3．4測(cè)試結(jié)果的判定。測(cè)定結(jié)果以抑制率表示。根據(jù)GB／T5009．199—2003判定要求，當(dāng)樣品對(duì)酶的抑制率≥50％時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需重復(fù)測(cè)2次以上。

3、注意事項(xiàng)
(1)定期校正調(diào)試、科學(xué)使用移液槍。選用250斗L和10斗L可調(diào)移液槍?zhuān)瑢�槍嘴先用清水沖洗再用純凈水沖洗，在電子天平上進(jìn)行吸液量校正。移液器使用時(shí)，必須遵循器具專(zhuān)用原則：吸取酶、顯色劑、底物的移液器貼上專(zhuān)用標(biāo)簽，移取試劑時(shí)一一對(duì)應(yīng)使用。
(2)檢測(cè)室溫度要控制在20—25℃，否則會(huì)影響酶的活性，影響結(jié)果刪。若完成對(duì)照測(cè)量后，儀器關(guān)機(jī)重啟，則需重新測(cè)量對(duì)照。進(jìn)行對(duì)照測(cè)量時(shí)，1 min后對(duì)照吸光度變化值應(yīng)在0．15以上，否則該酶試劑不能繼續(xù)使用。
(3)樣液制備過(guò)程中，浸提要充分，縮短時(shí)間對(duì)結(jié)果影響較大。酶試劑和樣品液或緩沖液的混合液靜置反應(yīng)時(shí)間為10 rain，反應(yīng)時(shí)間不同，結(jié)果不同。試劑從冰箱取出，先恢復(fù)至室溫，搖勻后再使用。酶、顯色劑和底物不能漏加或多加，否則對(duì)結(jié)果影響大。試劑使用時(shí)，必須遵循只出不進(jìn)原則：從酶、顯色劑、底物試劑瓶中移取出的試劑．不得返回原試劑瓶中，以免污染原試劑151。若被測(cè)比色杯中有氣泡產(chǎn)生。應(yīng)排除。以免影響測(cè)量結(jié)果。
(4)測(cè)量結(jié)果抑制率A％為“一一”，表示測(cè)量結(jié)果無(wú)效�？赡苡梢韵聨讉�(gè)原因造成：試劑從冰箱取出后，未恢復(fù)到室溫進(jìn)行對(duì)照測(cè)試；對(duì)照測(cè)試時(shí)間與樣品測(cè)試時(shí)間相隔太久。導(dǎo)致光照與樣品測(cè)試溫度條件相差較大；被測(cè)樣品色素干擾較嚴(yán)重；反應(yīng)試劑取用量是否準(zhǔn)確。另外，其他非測(cè)試孔空白的孔位可能也會(huì)出現(xiàn)“～一”㈣。儀器操作時(shí)，注意托盤(pán)上的孔位不能有頭發(fā)、棉絲等其他異物，如有污物或液體可用過(guò)濾紙擦干凈，以免影響光路測(cè)量。應(yīng)做好抽樣單、檢測(cè)結(jié)果等原始記錄的整理并保存好。
(5)抑制率≥50％的樣品，至少要重復(fù)檢測(cè)2次．才能確定此樣品是否合格。蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假磷類(lèi)農(nóng)藥的樣品5個(gè)，檢出率為6．3％。檢出農(nóng)藥為乙酰甲胺磷、毒死蜱、三唑磷、氧化樂(lè)果。
2．4有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果
由表5可以看出，在被檢測(cè)的80個(gè)樣品中，檢出有機(jī)氟類(lèi)農(nóng)藥的樣品3個(gè)，檢出率為3．8％。檢出農(nóng)藥為三氟氯氰菊酯、三唑酮、百菌清。
4、緒論與討論
(1)從樣品檢測(cè)添加回收率來(lái)看，添加回收率均在65％一130％之間，符合國(guó)家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。
(2)有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥自20世紀(jì)40年代開(kāi)始使剛，7忙80年代，一些國(guó)家相繼限用和禁用，我國(guó)于1983年停止生產(chǎn)樣品分析結(jié)果顯示，畢節(jié)地區(qū)特色產(chǎn)品中雖有槍出有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥，但根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)來(lái)看，樣品有檢出，但不超標(biāo)，說(shuō)明畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品是安全的。有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥，有的品種毒性較大，有一定的蓄積性，該類(lèi)農(nóng)藥在該次檢測(cè)中也有檢出，如三氟氯氰菊酯、三唑酮、百菌清。故須加強(qiáng)此類(lèi)農(nóng)藥使用的監(jiān)管力度。
(3)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥具有高效、速效和廣譜的特點(diǎn)，常用作殺蟲(chóng)劑，作用主要是抑制膽酯酶活性。該次檢測(cè)樣品中
有檢出乙酰甲胺磷、毒死蜱、三唑磷、氧化樂(lè)果幾種農(nóng)藥。從檢測(cè)結(jié)果分析，此類(lèi)農(nóng)藥有檢出，但殘留量遠(yuǎn)低于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，不會(huì)對(duì)畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品雖然衛(wèi)生指標(biāo)造成
(4)通過(guò)對(duì)畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)，對(duì)比我國(guó)食品中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)
品中農(nóng)藥殘留量低，污染少。但有農(nóng)藥檢出。希望有關(guān)部門(mén)加強(qiáng)監(jiān)管，加強(qiáng)合理使用農(nóng)藥的宣傳和指導(dǎo)，規(guī)范農(nóng)資市場(chǎng)，建立健全市場(chǎng)準(zhǔn)入產(chǎn)地準(zhǔn)出制度。杜絕劣質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)銷(xiāo)售。維護(hù)全區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全和進(jìn)出口貿(mào)易信譽(yù)。確保廣大消費(fèi)者吃上安全放心的特色農(nóng)產(chǎn)品。