牛奶蛋白質(zhì)測(cè)定的優(yōu)化操作

      牛奶蛋白質(zhì)是牛奶檢測(cè)的重要指標(biāo)，作為生命的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、調(diào)節(jié)代謝、抵御外來物質(zhì)入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關(guān)重要的作用。目前，牛奶蛋白質(zhì)的測(cè)定方法主要為國(guó)標(biāo)凱氏定氮法，是有機(jī)化合物含氮量測(cè)定最常有的方法，是蛋白質(zhì)測(cè)定的經(jīng)典方法，即使用蛋白質(zhì)測(cè)定儀來進(jìn)行測(cè)定。蛋白質(zhì)測(cè)定儀適用樣品廣泛，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，但試劑消耗量大，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，消化約6～8 h，且消化后樣品需定容，定容時(shí)容量瓶未搖勻，很容易出現(xiàn)結(jié)晶現(xiàn)象，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
      為改善國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法樣品稱樣量大，消化時(shí)間長(zhǎng)，消化后的樣品需定容，操作步驟多的現(xiàn)狀，本文對(duì)樣品的稱樣量進(jìn)行了優(yōu)化，經(jīng)典凱氏定氮法液體樣品的稱樣量為1～25 mL,因牛奶樣品均勻度較好，故本方法將樣品的稱樣量?jī)?yōu)化為1.0～1.5g。將樣品的稱樣量從10g減小到1.5g，其他檢測(cè)條件不變。如果取樣具有代表性,改變樣品的稱樣量,對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響不大。
      樣品消化時(shí)間主要包括氧化時(shí)間，沸騰時(shí)間。氧化時(shí)間中濃硫酸將有機(jī)樣品中的碳轉(zhuǎn)化成CO2（這時(shí)的溶液為黑色），氫元素轉(zhuǎn)化為H2O，氮元素轉(zhuǎn)化為銨鹽。氧化完畢后，溶液變澄清，進(jìn)入沸騰時(shí)間，在沸騰30 min后，樣品中氮元素全部轉(zhuǎn)化為氨，氮的回收率達(dá)到最高。樣品消化結(jié)束后，消化管中應(yīng)剩余5-6 mL濃硫酸，如果消化時(shí)硫酸消耗完了，會(huì)造成氮的損失。在消化期間如果硫酸加入量少，樣品會(huì)出現(xiàn)結(jié)晶情況，因此，硫酸用量應(yīng)適當(dāng)，而硫酸用量取決于樣品量，本方法中硫酸量的優(yōu)化參照的為國(guó)標(biāo)方法，國(guó)標(biāo)方法10 g樣品濃硫酸的用量為20 mL，即1 g樣品硫酸消耗的量為2 mL，現(xiàn)將樣品的稱樣量減小為1～1.5 g，硫酸的消耗量應(yīng)不大于3 mL，為保證樣品消化完后濃硫酸的量有剩余，故將硫酸的量定優(yōu)化為8.5 mL。