瘦肉精檢測(cè)方法——從現(xiàn)場(chǎng)快速篩查到實(shí)驗(yàn)室確證

鹽酸克倫特羅(Clenbuterol)俗稱(chēng)“瘦肉精”，屬于β-興奮劑，因?yàn)樵撍幙梢蕴岣呤萑饴剩瑴p少脂肪沉積和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，被一些畜牧養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促進(jìn)劑非法使用。人食用了飼喂克倫特羅作為添加劑的動(dòng)物所產(chǎn)生的畜產(chǎn)品后，殘留的克倫特羅可導(dǎo)致人體肌肉震顫、心悸、神經(jīng)過(guò)敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等癥狀，對(duì)消費(fèi)者的健康造成極大危害。因此世界許多國(guó)家現(xiàn)已被明令禁止在飼料中添加克倫特羅來(lái)增加動(dòng)物的瘦肉率。

　　我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定鹽酸克倫特羅在動(dòng)物體內(nèi)的殘留標(biāo)準(zhǔn)為：馬、牛肌肉0.1ug/kg、 肝、腎0.5ug/kg牛奶0.05ug/kg

　　1、 現(xiàn)場(chǎng)快速篩查產(chǎn)品

　　瘦肉精(鹽酸克倫特羅)膠體金檢測(cè)卡用于定性檢測(cè)動(dòng)物尿液(例如豬尿、牛尿、羊尿等)中鹽酸克倫特羅殘留，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需要5-10分鐘左右，靈敏度為3ng/ml(3ppb)�？焖俜奖悖�適用于屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市等現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

	訂貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	靈敏度
膠體金檢測(cè)卡	HQ09001	鹽酸克倫特羅(尿液)	50條/盒	3ppb
	HQ09001-1	鹽酸克倫特羅(組織)	50條/盒	1ppb

　　2、 快速檢測(cè)產(chǎn)品

　　瘦肉精（鹽酸克倫特羅）ELISA試劑盒使用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒方法可檢測(cè)尿，肌肉，肝臟及飼料中的鹽酸克倫特羅。同時(shí)用于處理96個(gè)樣品，操作時(shí)間短于45min，靈敏度為0.025-0.1ng/m(ppb)。具有經(jīng)濟(jì)、快速等優(yōu)點(diǎn)�？蛇M(jìn)行定性半定量，相對(duì)于膠體金檢測(cè)卡結(jié)果更準(zhǔn)確，適用于實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)。

ELISA快速檢測(cè)試劑盒	訂貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	靈敏度
	HE09002	鹽酸克倫特羅	96孔	0.1ppb
	HE09002-1	鹽酸克倫特羅	96孔	0.05ppb
	HE09002-2	鹽酸克倫特羅	96孔	0.025ppb

　　3、準(zhǔn)確定性定量產(chǎn)品

　　采用SPE-GC/MS或SPE-LC/MS等手段可對(duì)動(dòng)物組織、尿液、肝臟、飼料、動(dòng)物加工制品等中的鹽酸克倫特羅的進(jìn)行準(zhǔn)確定性定量，能提供確證數(shù)據(jù)報(bào)告。適用于實(shí)驗(yàn)室確證實(shí)驗(yàn)或出具法律依據(jù)報(bào)告。

　　

• 固相萃取柱：Cleanert PCX 150mg/6mL（P/N：CX1506）

• GC色譜柱：DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm（P/N:1525-3002）

• 參考配置：12位SPE真空裝置（P/N: VM12）

　　檢測(cè)方法如下

　　1.實(shí)驗(yàn)材料

　　1.1 固相萃取小柱：Cleanert PCX(150mg/6mL)P/N: CX1506

　　1.2 四種β-激動(dòng)劑藥物：鹽酸克侖特羅、沙丁胺醇、西馬特羅、萊克多巴胺等4種β-激動(dòng)劑藥物。

　　2. 試料的制備

　　準(zhǔn)確稱(chēng)取已絞碎的組織樣品10g，于50mL具塞離心管中。加入20mmol/L的乙酸銨緩沖溶液20mL，均質(zhì)5min。加入50uL β-鹽酸葡萄糖醛甙酶溶液，搖勻、超聲15min，于37℃酶解18h。于3000r/min離心5min，過(guò)濾上清液，收集濾液。

　　3. 凈化

　　 依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L鹽酸5mL潤(rùn)洗固相萃取小柱，將上述備用液過(guò)柱，依次用水5mL、甲醇5mL淋洗，真空抽干，用4%氨化甲醇5mL洗脫P(yáng)CX小柱，收集洗脫液于具塞玻璃試管中，50℃下氮?dú)獯蹈�。在樣液過(guò)柱和洗脫過(guò)程中流速控制在1mL/min左右。

　　4. 衍生化及檢測(cè)

　　將上述盛有殘?jiān)�的具塞玻璃試管放�?0℃烘箱中加熱片刻，除去水分后，加入甲苯100mL和雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）100mL，渦旋振蕩20s，密封玻璃塞，置于80℃恒溫烘箱中加熱1小時(shí)，冷卻后加入300mL甲苯，作為試樣溶液，供氣相色譜-質(zhì)譜分析（色譜柱：DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm，P/N:1525-3002）。

　　5. 結(jié)果

　　5.1 回收率實(shí)驗(yàn)（精密度和準(zhǔn)確度）

　　將豬肝空白樣品經(jīng)過(guò)液液萃取初步處理后，分別添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L五個(gè)濃度的試樣溶液，每批次內(nèi)同一濃度做5次平行實(shí)驗(yàn)，共4個(gè)批次（樣品典型回收率色譜圖見(jiàn)附圖）。

　　豬肝中實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表如下：

添加濃度（μg/L）	回收濃度（μg/L）	平均回收值（μg/L）	平均回收率（%）	相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）
1	0.75	0.72	72.40	5.93
	0.67
	0.72
	0.70
	0.78
2	1.62	1.63	81.30	1.23
	1.66
	1.60
	1.61
	1.64
5	4.02	4.24	84.80	4.16
	4.10
	4.27
	4.38
	4.43
10	8.24	8.45	84.45	2.81
	8.35
	8.77
	8.62
	8.25
100	90.24	9.12	91.15	2.86
	87.15
	91.77
	92.62
	93.95

　　5.2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)（批間誤差實(shí)驗(yàn)）：

　　豬肝中實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表如下：

批間	添加濃度（μg/L）
	1		2		5		10		100
	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%
1	72.40	5.93	81.30	3.49	84.80	6.16	84.45	3.59	91.15	2.86
2	75.37	6.12	80.47	5.37	84.74	7.55	87.46	4.68	90.05	3.86
3	70.09	7.85	80.80	6.57	83.10	8.17	83.21	5.39	89.53	4.16
4	76.73	4.90	78.50	8.35	82.90	5.11	85.95	5.72	88.27	5.93
平均值	73.65	6.20	80.25	5.95	83.88	6.75	85.27	4.84	89.75	4.20
RSD%	12.95		10.79		9.43		7.00		5.75

　　附圖：豬肝中0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L六個(gè)濃度檢測(cè)結(jié)果總離子流圖（TIC）代表圖譜：

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