農(nóng)藥殘留檢測相關(guān)知識

一、農(nóng)藥分類
農(nóng)藥是用于防治危害農(nóng)作物及農(nóng)副產(chǎn)品的病蟲害、雜草及其他有害生物的化學藥劑的統(tǒng)稱。其分類方法有多種，常見的幾種分類如下：
1、根據(jù)防治對象的不同，分為殺蟲劑、 螨劑、殺菌劑、除草劑、殺鼠劑等。常將防治害蟲的稱為殺蟲劑，防治紅蜘蛛的稱為殺螨劑，防治作物真菌、細菌及病毒的稱為殺菌劑，防治雜草的稱為除草劑，防治鼠類的稱為殺鼠劑。
2、根據(jù)農(nóng)藥的作用方式分為胃毒劑、觸殺劑、熏蒸劑、內(nèi)吸劑、引誘劑、驅(qū)避劑、拒食
劑、不育劑等。
3、根據(jù)農(nóng)藥的化學組成和結(jié)構(gòu)可分為有機農(nóng)藥和無機農(nóng)藥兩大類。農(nóng)藥中除少部分的無機物外，大部分都為有機化合物，其中有元素有機化合物、金屬有機化合物及一般有機化合物之分。我們所測試的有機磷屬于元素有機化合物之類。
另外還有根據(jù)農(nóng)藥的來源、農(nóng)藥的使用方法、防治原理等來分類。
二、生化分析適用于什么農(nóng)藥
絕大多數(shù)化學農(nóng)藥之所以能殺蟲、螨、或者有效的主要原因就在于它們對生物內(nèi)的酶有不同程度的抑制作用。因此，利用生化分析測試的農(nóng)藥應該是生物體內(nèi)某種酶的抑制劑(激活
劑)，使得這些酶失去正常的生理作用，從而使生物表現(xiàn)出中毒的癥狀。當然，基于目前的研究水平，有些農(nóng)藥雖然知道它對某種酶有不利的影響，但是該酶的提取，保存等因素的原因也制約著用生化方法來測試該種農(nóng)藥。所以雖然生物體內(nèi)酶的種類很多，化學農(nóng)藥作用原理也大多基于對生物體內(nèi)酶的作用，但利用生化分析進行測試的農(nóng)藥種類并不多。

三、測試農(nóng)藥殘留有哪些方法
農(nóng)藥殘留的測試方法，總的來說可以分為常規(guī)測試方法和速測方法。常規(guī)的測試方法有氣相色譜、凝膠色譜及薄層色譜法。這些方法都是利用農(nóng)藥在不同載體中的分配系數(shù)不同而得到分離，從而定性和定量來測試農(nóng)藥的種類及含量。速測方法主要有速測卡法和酶抑制率法(又稱分光光度法)兩種。無論是速測卡法還是酶抑制率法，其都是利用酶活性被抑制原理。

四、乙酰膽堿酯酶對乙酰膽堿的作用原理
乙酰膽堿酯酶和乙酰膽堿作用時，首先形成一個酶底物的絡(luò)合物，接著乙酰膽堿上的�；�轉(zhuǎn)移到酶分子上,形成乙酰化酯酶。乙�；�酯酶很不穩(wěn)定，極易水解，其半衰期約為0.1毫秒。乙�；�酯酶水解后又釋放出酶分子，從而使酶復活，再循環(huán)利用。

五、有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制過程，什么是可逆抑制
有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥是乙酰膽堿酯酶的底物膽堿酯的結(jié)構(gòu)類似物。它們同乙酰膽堿酯酶作用時，首先形成非共價的中間復合物，然后被水解，水解的同時，磷酰基與膽堿酯酶活性中心絲氨酸羥基作用生成以共價結(jié)合的磷�；�酶。磷�；�酶中的磷�；�基很難水解，所以磷�；�酶很穩(wěn)定，其穩(wěn)定性是乙�；�酶的107倍以上。因此，可以說有機磷對乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的。不可逆抑制是指抑制劑與酶分子上的某些基團以牢固的共價鍵結(jié)合使酶失活，它的特點是隨時間的延長會逐漸的增加抑制，最后達到完全抑制。而可逆抑制是指抑制劑與酶分子結(jié)合是可逆的，不會產(chǎn)生不可逆的共價修飾等作用。

六、米氏常數(shù)的含義
米氏常數(shù)km表示酶與底物的復合物的離解常數(shù)，每一種酶對于特定的底物，都有自己特定的km。1/km稱為酶與底物結(jié)合的親和常數(shù)。米氏常數(shù)也可以定量為在一定的酶濃度下，酶觸反應速度為最大反應速度一半時底物的濃度。

七、預反應過程中，影響農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率的因素
農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率的大小主要取決于農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)。當農(nóng)藥分子中含有起作用的強吸電子基團時，磷�；�與乙酰膽堿酯酶的絲氨酸羥基就愈容易結(jié)合，在一定時間內(nèi)，抑制率就愈大。當然，對于一定的農(nóng)藥，在預反應中，抑制環(huán)境溫度和抑制時間及農(nóng)藥濃度等都是影響抑制率大小的因素。所以在預反應中，應盡可能地保證環(huán)境溫度、抑制時間以及農(nóng)藥濃度的一致。有些農(nóng)藥剛配制好時測試的抑制率較大，幾天后同樣農(nóng)藥同樣條件再測試時可能抑制率又降低，這就是因為部分農(nóng)藥已經(jīng)降解，起不到抑制作用所致。

八、預反應結(jié)束后，影響抑制率測定的因素
酶抑制率法測試農(nóng)藥殘留的過程中，預反應完成后，再加入底物進行顯色反應。測試根據(jù)體系中顏色變化的情況來決定抑制率的大小。所以在測試一批待測樣時，加入底物和上機測試的過程應盡量快，且加入底物的量一定要一致，也不得有任何溶液的損失，否則測出的數(shù)據(jù)時不可靠的。

九、試樣提取中應該注意些什么
有些果蔬如蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等中含有對酶有影響的植物次生質(zhì)，有些蔬菜中葉綠素的含量太高，影響比色反應。所以對于以上種類的果蔬，應盡可能的采取整株(體)浸提的辦法來消除干擾。另外，由于同一株(個)待測樣品，其不同部位的農(nóng)藥含量不同，因此，進行重復性測試時，最好為同一個待測液的不同次數(shù)測定，否則可能會出現(xiàn)因取樣不同出現(xiàn)重現(xiàn)性不好的情況。

十、藥劑應怎樣保存
酶抑制率測試法所用的試劑大多為生化試劑，因此它們的保存條件較為苛刻。對于粉劑化的酶及底物應保存在-20℃環(huán)境中。對于已經(jīng)配制成溶液的藥劑如酶液、底物溶液、顯色劑溶液等應置于0-4℃環(huán)境中保存。而浸提劑無論配制成溶液與否，在常下密封保存即可。 十一、國家對農(nóng)藥殘留速測有哪些指標，其測試方法有哪幾類
目前國家對農(nóng)藥殘留速測出臺的標準有《中華人民共和國國家標準》和《中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準》兩個標準。這兩個標準規(guī)定了測試結(jié)果的判斷標準及以及常見農(nóng)藥如甲胺磷、氧化樂果、克百威、敵敵畏等農(nóng)藥的最低檢出限。不同的標準，根據(jù)所用酶的種類及方法，規(guī)定的各種農(nóng)藥的檢出限量和判斷標準也不同。例如，農(nóng)業(yè)行業(yè)標準判斷依據(jù)為抑制率大于70%時不合格，而國標有規(guī)定抑制率大于50%為不合格，也有規(guī)定吸光度值大于0.9為不合
格。兩種標準所使用的方法都是利用酶被農(nóng)藥抑制，活性降低原理。其中國家標準中，有使用乙酰膽堿酯酶，也有使用植物酯酶—面粉酶，而行業(yè)標準則使用的是丁酰膽堿酯酶。